Сибирская
язва — острая антропонозная инфекционная
болезнь, вызываемая Bacillus anthracis,
характеризуется тяжелой интоксикацией,
поражением кожи, лимфатических узлов.
Таксономия. Возбудитель
относится к отделу Firmicutes,
роду Bacillus.
Морфологические
свойства.
Очень крупные грамположительные палочки
с обрубленными концами, в мазке из чистой
культуры располагаются короткими
цепочками (стрептобациллы). Неподвижны;
образуют расположенные центрально
споры, а также капсулу.
Культуральные
свойства.
Аэробы. Хорошо растут на простых
питательных средах в диапазоне
температур 10—40С, температурный оптимум
роста 35С. На жидких средах дают придонный
рост; на плотных средах образуют
крупные, с неровными краями, шероховатые
матовые колонии (R-форма).
На средах, содержащих пенициллин,
через 3ч роста сибиреязвенные бациллы
образуют сферопласты, расположенные
цепочкой и напоминающие в мазке
жемчужное ожерелье.
Биохимические
свойства.
Ферментативная активность достаточно
высока: возбудители ферментируют до
кислоты глюкозу, сахарозу, мальтозу,
крахмал, инулин; обладают протеолитической
и липолитической активностью. Выделяют
желатиназу, обладают слабой гемолитической,
лецитиназной и фосфатазной активностью.
Выделяют
желатиназу, проявляют низкую гемолитическую,
лецитиназную и фосфатазную активность.
Антигены
и факторы патогенности.
Содержат родовой соматический
полисахаридный и видовой белковый
капсульный антигены. Образуют белковый
экзотоксин, обладающий антигенными
свойствами и состоящий из нескольких
компонентов (летальный, протективный
и вызывающий отеки). Вирулентные
штаммы в восприимчивом организме
синтезируют сложный экзотоксин и большое
количество капсульного вещества с
выраженной антифагоцитарной активностью.
Резистентность.
Вегетативная форма неустойчива к
факторам окружающей среды, споры
чрезвычайно устойчивы и сохраняются
в окружающей среде, выдерживают
кипячение. Чувствительны к пенициллину
и другим антибиотикам; споры устойчивы
к антисептикам.
Эпидемиология и патогенез.
Источник инфекции — больные животные,
чаще крупный рогатый скот, овцы, свиньи.
Человек заражается в основном контактным
путем, реже алиментарно, при уходе
за больными животными, переработке
животного сырья, употреблении мяса.
Входными воротами инфекции в большинстве
случаев являются поврежденная кожа,
значительно реже слизистые оболочки
дыхательных путей и желудочно-кишечного
тракта. В основе патогенеза лежит
действие экзотоксина, который вызывает
коагуляцию белков, отек тканей, приводят
к развитию токсико-инфекционного шока.
Клиника. Различают
кожную, легочную и кишечную формы
сибирской язвы. При кожной (локализованной)
форме на месте внедрения возбудителя
появляется характерный сибиреязвенный
карбункул, сопровождается отеком.
Легочная и кишечная формы относятся к
генерализованным формам и выражаются
геморрагическим и некротическим
поражением соответствующих органов.
Иммунитет. После
перенесенной болезни развивается
стойкий клеточно-гуморальный
иммунитет.
Наиболее
достоверным методом лабораторной
диагностики сибирской язвы является
выделение из исследуемого материала
культуры возбудителя. Диагностическую
ценность представляют также реакция
термопреципитации по Асколи и
кожно-аллергическая проба.
Бактериоскопическое
исследование. Изучение
окрашенных по Граму мазков из
патологического материала позволяет
обнаружить возбудителя, представляющего
собой грамположительную крупную
неподвижную стрептобациллу. В организме
больных и на белковой питательной
среде микроорганизмы образуют капсулу,
в почве— споры.
Бактериологическое
исследование. Исследуемый
материал засевают на чашки с питательным
и кровяным агаром, а также в пробирку с
питательным бульоном. Посевы инкубируют
при 37С в течение 18ч. В бульоне
В. anthracis растет
в виде хлопьевидного осадка; на агаре
вирулентные штаммы образуют колонии R-формы.
Авирулентные или слабовирулентные
бактерии образуют S-формы
колоний.
В. anthracis обладает
сахаролитическими свойствами, не
гемолизирует эритроциты, медленно
разжижает желатин. Под действием
пенициллина образует
сферопласты, имеющие вид «жемчужин». Это явление используется для дифференциации В. anthracis от непатогенных бацилл.
Биопроба. Исследуемый
материал вводят подкожно морским
свинкам, кроликам. Готовят мазки из
крови и внутренних органов, делают посевы
для выделения чистой культуры
возбудителя.
Экспресс-диагностика проводится
с помощью реакции термопреципитации
по Асколи и иммунофлюоресцентного
метода.
Реакцию
Асколи ставят при необходимости
диагностировать сибирскую язву у
павших животных или у умерших людей.
Образцы исследуемого материала измельчают
и кипятят в пробирке с изотоническим
раствором хлорида натрия в течение 10
мин, после чего фильтруют до полной
прозрачности.
Метод
иммунофлюоресценции позволяет выявить
капсульные формы В. anthracis в
экссудате. Мазки из экссудата через
5—18 ч после заражения животного
обрабатывают капсульной сибиреязвенной
антисывороткой, а затем флюоресцирующей
антикроличьей сывороткой. В препаратах,
содержащих капсульные бациллы, наблюдается
желто-зеленое свечение возбудителя.
Кожно-аллергическая
проба. Ставится
на внутренней поверхности предплечья
— внутрикожно вводят 0,1 мл антраксина.
При положительной реакции через 24 ч
появляются гиперемия и инфильтрат.
Лечение: антибиотики
и сибиреязвенный иммуноглобулин.
Для антибактериальной терапии препарат
выбора – пенициллин.
Профилактика. Для
специфической профилактики используют
живую сибиреязвенную вакцину. Для
экстренной профилактики назначают
сибиреязвенный иммуноглобулин.
Преципитирующая
сибиреязвенная сыворотка. Получена из
крови кролика, гипериммунизированного
культурой В. anthracis.
Применяется для постановки реакции
термопреципитации по Асколи.
Сибиреязвенная
живая вакцина СТИ. Высушенную
взвесь живых спор В. anthracis авирулентного
бескапсульного штамма. Применяется для
профилактики сибирской язвы.
Противосибиреязвенный
иммуноглобулин. Гамма-глобулиновая
фракция сыворотки крови лошади,
гипериммунизированной живой сибиреязвенной
вакциной и вирулентным штаммом
В.anthracis,
используется с профилактической и
лечебной целью.
Соседние файлы в предмете Микробиология
№ 16 Возбудитель сибирской язвы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение. Сибирская язва — острая антропонозная инфекционная болезнь, вызываемая Bacillusanthracis, характеризуется тяжелой интоксикацией, поражением кожи, лимфатических узлов. Возбудитель относится к отделу Firmicutes, роду Bacillus. Очень крупные грамположительные палочки с обрубленными концами, в мазке из чистой культуры располагаются короткими цепочками (стрептобациллы). Неподвижны; образуют расположенные центрально споры, а также капсулу. Аэробы. Хорошо растут на простых питательных средах в диапазоне температур 10—40С, температурный оптимум роста 35С. На жидких средах дают придонный рост; на плотных средах образуют крупные, с неровными краями, шероховатые матовые колонии (R-форма). На средах, содержащих пенициллин, через 3ч роста сибиреязвенные бациллы образуют сферопласты, расположенные цепочкой и напоминающие в мазке жемчужное ожерелье. Ферментативная активность достаточно высока: возбудители ферментируют до кислоты глюкозу, сахарозу, мальтозу, крахмал, инулин; обладают протеолитической и липолитической активностью. Выделяют желатиназу, обладают слабой гемолитической, лецитиназной и фосфатазной активностью. Выделяют желатиназу, проявляют низкую гемолитическую, лецитиназную и фосфатазную активность. Антигены и факторы патогенности. Содержат родовой соматический полисахаридный и видовой белковый капсульный антигены. Образуют белковый экзотоксин, обладающий антигенными свойствами и состоящий из нескольких компонентов (летальный, протективный и вызывающий отеки). Вирулентные штаммы в восприимчивом организме синтезируют сложный экзотоксин и большое количество капсульного вещества с выраженной антифагоцитарной активностью. . Вегетативная форма неустойчива к факторам окружающей среды, споры чрезвычайно устойчивы и сохраняются в окружающей среде, выдерживают кипячение. Чувствительны к пенициллину и другим антибиотикам; споры устойчивы к антисептикам. Эпидемиология и патогенез. Источник инфекции — больные животные, чаще крупный рогатый скот, овцы, свиньи. Человек заражается в основном контактным путем, реже алиментарно, при уходе за больными животными, переработке животного сырья, употреблении мяса. Входными воротами инфекции в большинстве случаев являются поврежденная кожа, значительно реже слизистые оболочки дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта. В основе патогенеза лежит действие экзотоксина, который вызывает коагуляцию белков, отек тканей, приводят к развитию токсико-инфекционного шока. Различают кожную, легочную и кишечную формы сибирской язвы. При кожной (локализованной) форме на месте внедрения возбудителя появляется характерный сибиреязвенный карбункул, сопровождается отеком. Легочная и кишечная формы относятся к генерализованным формам и выражаются геморрагическим и некротическим поражением соответствующих органов. После перенесенной болезни развивается стойкий клеточно-гуморальный иммунитет.: Наиболее достоверным методом лабораторной диагностики сибирской язвы является выделение из исследуемого материала культуры возбудителя. Диагностическую ценность представляют также реакция термопреципитации по Асколи и кожно-аллергическая проба. Изучение окрашенных по Граму мазков из патологического материала позволяет обнаружить возбудителя, представляющего собой грамположительную крупную неподвижную стрептобациллу. В организме больных и на белковой питательной среде микроорганизмы образуют капсулу, в почве— споры. Исследуемый материал засевают на чашки с питательным и кровяным агаром, а также в пробирку с питательным бульоном. Посевы инкубируют при 37С в течение 18ч. В бульоне В. anthracis растет в виде хлопьевидного осадка; на агаре вирулентные штаммы образуют колонии R-формы. Авирулентные или слабовирулентные бактерии образуют S-формы колоний. В. anthracis обладает сахаролитическими свойствами, не гемолизирует эритроциты, медленно разжижает желатин. Под действием пенициллина образует сферопласты, имеющие вид «жемчужин». Это явление используется для дифференциации В. anthracisот непатогенных бацилл. Исследуемый материал вводят подкожно морским свинкам, кроликам. Готовят мазки из крови и внутренних органов, делают посевы для выделения чистой культуры возбудителя.проводится с помощью реакции термопреципитации по Асколи и иммунофлюоресцентного метода. Реакцию Асколи ставят при необходимости диагностировать сибирскую язву у павших животных или у умерших людей. Образцы исследуемого материала измельчают и кипятят в пробирке с изотоническим раствором хлорида натрия в течение 10 мин, после чего фильтруют до полной прозрачности. Метод иммунофлюоресценции позволяет выявить капсульные формы В. anthracis в экссудате. Мазки из экссудата через 5—18 ч после заражения животного обрабатывают капсульной сибиреязвенной антисывороткой, а затем флюоресцирующей антикроличьей сывороткой. В препаратах, содержащих капсульные бациллы, наблюдается желто-зеленое свечение возбудителя. Ставится на внутренней поверхности предплечья — внутрикожно вводят 0,1 мл антраксина. При положительной реакции через 24 ч появляются гиперемия и инфильтрат. антибиотики и сибиреязвенный иммуноглобулин. Для антибактериальной терапии препарат выбора – пенициллин. Для специфической профилактики используют живую сибиреязвенную вакцину. Для экстренной профилактики назначают сибиреязвенный иммуноглобулин. Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка. Получена из крови кролика, гипериммунизированного культурой В. anthracis. Применяется для постановки реакции термопреципитации по Асколи. Сибиреязвенная живая вакцина СТИ. Высушенную взвесь живых спор В. anthracis авирулентного бескапсульного штамма. Применяется для профилактики сибирской язвы. Противосибиреязвенный иммуноглобулин. Гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови лошади, гипериммунизированной живой сибиреязвенной вакциной и вирулентным штаммом В.anthracis, используется с профилактической и лечебной целью.
1. Энтерококки. Особенности энтерококков. Эпидемиология энтерококков. Клинические проявления поражений энтерококками. Выявление энтерококков. Диагностика энтерококков.2. Факультативные анаэробные спорообразующие грамположительные палочки. Бациллы. Bacillus. Свойства бацилл. Особенности бацилл.3. Возбудитель сибирской язвы. Сибирская язва. Bacillus anthracis. Эпидемиология сибирской язвы. Пути и механизмы заражения сибирской язвой.4. Морфология bacillus anthracis. Морфология сибирской язвы. Тинкториальные свойства сибирской язвы. Признаки сибирской язвы.5. Культуральные свойства bacillus anthracis. Культуральные свойства сибирской язвы. Спорообразование сибирской язвой. Биохимические свойства сибирской язвы.6. Антигенная структура bacillus anthracis. Антигены возбудителя сибирской язвы. Капсульные, соматические антигены сибирской язвы. Патогенность сибирской язвы.7. Клинические проявления заражения сибирской язвой. Клиника сибирской язвы. Формы сибирской язвы. Клинические признаки сибирской язвы.8. Микробиологическая диагностика сибирской язвы. Принципы микробиологической диагностики сибирской язвы. Бактериоскопический, бактериологический, биологический, кожно-аллергический метод диагностики сибирской язвы.9. Лечение сибирской язвы. Профилактика сибирской язвы. Иммунопрофилактика сибирской язвы. Ветеринарно-санитарные меры профилактики сибирской язвы. Санитарный надзор за сибирской язвой.10. Bacillus cereus. Морфология bacillus cereus. Культуральные свойства bacillus cereus. Клиника отравлений bacillus cereus. Принципы микробиологической диагностики bacillus cereus. Выявление bacillus cereus.
Bacillus anthracis ( сибирская язва )— крупная неподвижная палочка (5-10×1-2 мкм) с закруглёнными концами. При образовании цепочек концы клеток выглядят обрезанными под прямым углом.
Отсутствие подвижности — абсолютный дифференцирующий признак сибиреязвенной палочки, отличающий её от других бацилл. В клиническом материале бактерии располагаются парами или в виде коротких цепочек.
На питательных средах возбудитель сибирской язвы образуют более длинные цепочки; при этом морфология палочек несколько изменяется — они слегка утолщены на концах и образуют сочленения, напоминающие «бамбуковую трость». Эти морфологические изменения ещё более явно проявляются при температурной фиксации при окрашивании.
По Граму сибиреязвенная палочка окрашивается положительно; также хорошо воспринимает различные анилиновые красители. Для защиты от действия факторов резистентности возбудитель сибирской язвы образует капсулы, наблюдаемые только у бактерий, выделенных из организмов животных или человека, либо на средах, содержащих нативную сыворотку.
Другой характерный признак возбудителя сибирской язвы — высокая чувствительность сибиреязвенной палочки к пенициллину. Обработка культур сибирской язвы приводит к разрушению клеточных стенок и образованию цепочек, состоящих из протопластов, напоминающих «жемчужное ожерелье».
— Также рекомендуем «Культуральные свойства bacillus anthracis. Культуральные свойства сибирской язвы. Спорообразование сибирской язвой. Биохимические свойства сибирской язвы.»
Сибирская
язва — острая антропонозная инфекционная
болезнь, вызываемая Bacillus
anthracis,
характеризуется тяжелой интоксикацией,
поражением кожи, лимфатических узлов.
Таксономия.
Возбудитель относится к отделу Firmicutes,
роду Bacillus.
Эпидемиология
и патогенез.
Источник инфекции — больные животные,
чаще крупный рогатый скот, овцы, свиньи.
Человек заражается в основном контактным
путем, реже алиментарно, при уходе
за больными животными, переработке
животного сырья, употреблении мяса.
Входными воротами инфекции в большинстве
случаев являются поврежденная кожа,
значительно реже слизистые оболочки
дыхательных путей и желудочно-кишечного
тракта. В основе патогенеза лежит
действие экзотоксина, который вызывает
коагуляцию белков, отек тканей, приводят
к развитию токсико-инфекционного шока.
Клиника.
Различают кожную, легочную и кишечную
формы сибирской язвы. При кожной
(локализованной) форме на месте внедрения
возбудителя появляется характерный
сибиреязвенный карбункул, сопровождается
отеком. Легочная и кишечная формы
относятся к генерализованным формам и
выражаются геморрагическим и некротическим
поражением соответствующих органов.
Иммунитет.
После перенесенной болезни развивается
стойкий клеточно-гуморальный
иммунитет.
Бактериоскопическое
исследование.
Изучение окрашенных по Граму мазков из
патологического материала позволяет
обнаружить возбудителя, представляющего
собой грамположительную крупную
неподвижную стрептобациллу. В организме
больных и на белковой питательной
среде микроорганизмы образуют капсулу,
в почве— споры.
Бактериологическое
исследование.
Исследуемый
материал засевают на чашки с питательным
и кровяным агаром, а также в пробирку с
питательным бульоном. Посевы инкубируют
при 37С в течение 18ч. В бульоне В. anthracis
растет в виде хлопьевидного осадка; на
агаре вирулентные штаммы образуют
колонии R-формы.
Авирулентные или слабовирулентные
бактерии образуют S-формы
колоний.
В.
anthracis
обладает сахаролитическими свойствами,
не гемолизирует эритроциты, медленно
разжижает желатин. Под действием
пенициллина образует сферопласты,
имеющие вид «жемчужин». Это явление
используется для дифференциации В.
anthracis
от непатогенных бацилл.
Биопроба.
Исследуемый
материал вводят подкожно морским свинкам
кроликам. Готовят мазки из крови и
внутренних органов, делают посевы для
выделения чистой культуры возбудителя.
Экспресс-диагностика
проводится
с помощью реакции термопреципитации
по Асколи и иммунофлюоресцентного
метода.
Метод
иммунофлюоресценции позволяет выявить
капсульные формы В. anthracis
в экссудате. Мазки из экссудата через
5—18 ч после заражения животного
обрабатывают капсульной сибиреязвенной
антисывороткой, а затем флюоресцирующей
антикроличьей сывороткой. В препаратах,
содержащих капсульные бациллы, наблюдается
желто-зеленое свечение возбудителя.
Кожно-аллергическая
проба.
Ставится
на внутренней поверхности предплечья
— внутрикожно вводят 0,1 мл антраксина.
При положительной реакции через 24 ч
появляются гиперемия и инфильтрат.
Лечение:
антибиотики и сибиреязвенный
иммуноглобулин. Для антибактериальной
терапии препарат выбора – пенициллин.
Профилактика.
Для специфической профилактики
используют живую сибиреязвенную
вакцину. Для экстренной профилактики
назначают сибиреязвенный иммуноглобулин.
Преципитирующая
сибиреязвенная сыворотка. Получена
из крови кролика, гипериммунизированного
культурой В. anthracis.
Применяется для постановки реакции
термопреципитации по Асколи.
Сибиреязвенная
живая вакцина СТИ. Высушенную
взвесь живых спор В. anthracis
авирулентного бескапсульного штамма.
Применяется для профилактики сибирской
язвы.
Противосибиреязвенный
иммуноглобулин. Гамма-глобулиновая
фракция сыворотки крови лошади,
гипериммунизированной живой сибиреязвенной
вакциной и вирулентным штаммом
В.anthracis,
используется с профилактической и
лечебной целью.
Сибирская язва (antrax, греч.) — острое инфекционное заболевание животных и человека. Оно известно человечеству с глубокой древности и описано греческими, римскими, египетскими и арабскими авторами. В своих сочинениях они называют это заболевание «священный огонь» или «персидский огонь». Первое достоверное описание болезни у человека сделал Моран в 1766 г. в докладе Академии наук в Париже. Позднее появились многочисленные описания этой болезни у человека.
В России сибирскую язву у животных и человека наблюдал в 1731 г. Иоганн Гмелин (Российская академия наук) во время путешествия по России. Русский врач А. Эшке, работавший на Алтае в 1758 г., значительно раньше, чем за рубежом, сообщил, что сибирская язва является заболеванием, поражающим человека и животных. Особенно большое значение имели исследования С. С. Андриевского. В 1788 г. героическим опытом самозаражения он доказал идентичность сибирской язвы человека и животных, ему же принадлежит и современное русское название болезни.
Возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis впервые наблюдал при микроскопии крови павших коров немецкий врач Поллендер (1849). В следующем году французский ученый Давэн обнаружил те же микробы в крови и органах павших овец и экспериментально заразил такой кровыо здоровых овец и лошадей. В 1855 г. Ф.Брауэль опубликовал результаты исследований крови погибшего от сибирской язвы человека с последующим заражением этой кровью многочисленных животных. Работы Р. Коха дали науке ключ к пониманию сущности сибиреязвенной инфекции, путей ее возникновения, возможностей сохранения в живом организме и внешней среде.
По прошествии некоторого времени Л. Пастер со своими учениками приготовил вакцину и дал в руки ветеринарным врачам совершенно новый метод предохранения от этой опасной инфекции.
Капсула В. anthracis (окраска по Бурри и люминесцентной сывороткой).
а) Таксономия. Bacillus anthracis принадлежит к классу Bacilli, порядку Bacillales, семейству спорообразующих микроорганизмов Bacillaceae, роду Bacillus. Род Bacillus насчитывает около 100 близкородственных возбудителю сибирской язвы сапрофитов. Особенно следует выделить виды Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis и Bacillus mycoides. Возбудитель сибирской язвы обладает почти универсальной патогенностью для млекопитающих. В. cereus способен вызывать у людей пищевые отравления, В. thuringiensis является энтомопатогенным микроорганизмом. Все они имеют чрезвычайно выраженное фенотипическое и генетическое подобие, большинство из них обитает в одних и тех же экологических нишах, в связи с чем их дифференциация часто вызывает определенные трудности при лабораторной диагностике сибирской язвы.
б) Морфологические и культурально-биохимические свойства. В. anthracis — крупная неподвижная грамположительная палочка, хорошо окрашивается всеми анилиновыми красителями. Встречается в трех формах — вегетативной без капсулы, вегетативной капсульной и споровой. Размеры вегетативных клеток — 1-1,5×6-10 мкм, спор — 0,8-1×1,5 мкм. В мазках с питательных сред палочки в вегетативной форме образуют длинные цепочки; концы микроорганизмов в окрашенных препаратах обрублены или несколько вогнуты, цепочка напоминает бамбуковую трость с коленчатыми сочленениями. Капсулу В. anthracis образует только в живом организме или при культивировании на специальных питательных средах.
В препаратах из патологического материала палочки расположены поодиночке, попарно или короткими цепочками, окружены капсулой, зачастую общей для группы клеток. Капсула и споры трудно воспринимают краски, для их окрашивания используют специальные методы.
При неблагоприятных условиях существования возбудитель сибирской язвы способен формировать споры. В каждой вегетативной клетке образуется только одна спора. Форма спор овальная, расположение центральное, диаметр не превышает поперечника микробной клетки. Спорообразование происходит вне живого организма, в условиях внешней среды или на питательных средах при свободном доступе кислорода, дефиците питательных веществ, определенной влажности, нейтральной или слабощелочной среде, температуре 26-37°С. При температуре выше 43°С и ниже 12°С спорообразование прекращается. Биологическая роль спор прежде всего заключается в том, что они являются формой защиты спорообразующих бактерий от вредного воздействия окружающей среды и тем самым выполняют функцию сохранения вида.
Споры способны долго сохранять генетический материал исходных клеток и обеспечивать передачу основных свойств потомству в последующих генерациях. Образование споры начинается с формирования проспоры. По мере образования клеточной стенки (оболочки) ироспора превращается в спору. Одновременно с образованием оболочки спор происходит поглощение Са++, затем следует синтез дипиколиновой кислоты. В стадии образования зрелых спор происходит уплотнение клеточных стенок и цитоплазмы. Остатки спорангия полностью распадаются и лизируются. Все или почти все споры становятся разобщенными, отличаются хорошей светопреломляемостью. Наряду со штаммами, хорошо образующими споры, встречаются и аспорогеные штаммы.
Возбудитель сибирской язвы — аэроб или факультативный анаэроб. Хорошо размножается на простых питательных средах.
Колонии В. anthracis на агаре.
Оптимальная температура роста 34-37°С, оптимальное значение pH 7,2-7,5. Хорошо растет на обычных питательных средах, характер роста в совокупности с другими признаками учитывается при идентификации. При посевах на чашки Петри с питательным агаром из гидролизата мяса по Хоттингеру (2,0-2,5 г/л аминного азота, pH 7,2-7,3) после суточной инкубации при 35-37°С микроорганизм формирует крупные шероховатые матовые колонии в R-форме с «шагреневой» поверхностью, неровными краями и отходящими от них волнистыми отростками, напоминающими при просмотре в микроскопе (малое увеличение) «локоны волос» или «львиную гриву». На мясопептонном бульоне или 1%-ной пептонной воде возбудитель сибирской язвы растет в виде «комочка ваты», трудно разбивающегося при встряхивании, при этом бульон остается прозрачным.
В. anthracis, как и сапрофиты этого рода, является природным ауксотрофом, нуждающимся в аминокислотах и тиамине. Имеющиеся в литературе сведения о питательных потребностях возбудителя сибирской язвы достаточно противоречивы. Штаммы В. anthracis с зависимостями от содержания аминокислот ароматической группы (фенилаланин, тирозин, триптофан) могут быть менее вирулентными, что используется для снижения остаточной вирулентности перспективных вакцинных штаммов.
Возбудитель сибирской язвы биохимически активен — способен разлагать с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, сахарозу и некоторые другие сахара, но не разлагает лактозу. При росте на кровяном агаре с 3-5% дефибринированной крови барана гемолиз не наблюдается, в то время как большинство спорообразующих сапрофитов дает быстрый гемолиз (через 12-18 ч при 37°С). Отсутствие гемолитических свойств у возбудителя сибирской язвы считалось наиболее постоянным биохимическим тестом. Однако дальнейшее изучение этого признака показало, что типичные по всем свойствам высоковирулентные сибиреязвенные штаммы вызывают гемолиз отмытых эритроцитов барана; не вызывают гемолиза штаммы, имеющие какие-либо отклонения в капсуло-, токсинообразовании и питательных потребностях. Оптимальные значения pH для проявления гемолитической активности — 5,5-6,5 (пик активности при pH 6,2). При значениях pH выше 8,2 и ниже 4,5 активность фермента практически не выявляется.
Бацилла сибирской язвы обладает протеолитической активностью; при посеве уколом в столбик 10-12%-ного мясопептонного желатина и выращивании при 22°С рост микроорганизма напоминает елочку, опрокинутую верхушкой вниз; на 3-5-й день желатин разжижается в виде воронки. Большинство сапрофитов полностью разжижает желатин в более короткие сроки. Протеолитическая активность возбудителя сибирской язвы рассматривается также в связи с вирулентностью, хотя и известны протеолитические варианты вакцинных штаммов. Обладая выраженной протеолитической активностью, сибиреязвенные штаммы подразделяются на высокоактивные и слабоактивные. Наиболее активные штаммы способны гидролизовать широкий спектр белковых субстратов: фибриноген, желатин, фибрин, казеин, гемоглобин, альбумин, коллаген. Ионы Са, Mg являются стимуляторами активности выработки протеаз.
Ингибиторами для отдельных штаммов В. anthracis являются ионы Zn, Mn. На хромосоме В. anthracis выявлены участки, кодирующие синтез протеаз, гемолизинов и гемагглютининов. Возбудитель сибирской язвы не образует фермент лецитиназу: при росте на агаре с куриным желтком помутнения агара вокруг колоний не наблюдается, при посеве на жидкую желточную среду желток не свертывается даже при 5-6-суточном инкубировании. Этим он отличается от сапрофитов, свертывающих желток в течение 6-10 ч и дающих зону коагуляции желтка вокруг выросших колоний. Возбудитель сибирской язвы в отличие от сапрофитных бацилл не образует щелочной фосфатазы, а следовательно, не способен разлагать фосфаты, добавляемые в питательную среду (тест на фосфатазу).
Типичный рост В.anthracis в бульоне через 18-20 ч — «комочек ваты» на дне пробирки.
В. anthracis обладает высокой чувствительностью к антибиотикам, все без исключения природные сибиреязвенные штаммы, независимо от их вирулентности, места выделения и биологических свойств, чувствительны к широкому спектру антибиотиков, беталактамных, аминогликозидных, рифампициновых и тетрациклиновых, что может быть дополнительным тестом при их дифференциации с близкородственными бациллами. Чувствительные к бензилпенициллину штаммы при выращивании на МПА или бульоне в присутствии 0,5-0,05 ЕД/мл бензилпенициллина через 3 ч инкубирования образуют цепочки из шарообразных клеток — «жемчужное ожерелье».
Микроб чувствителен к сибиреязвенному гамма- и К-бактериофагам. Проба с бактериофагом, тесты «жемчужное ожерелье» и на фосфатазу являются наиболее стабильными, и на них следует ориентироваться при идентификации возбудителя сибирской язвы.
Устойчивость к факторам внешней среды. Возбудитель сибирской язвы в соответствии с биологической формой существования обладает различной устойчивостью к неблагоприятным факторам внешней среды. Микроорганизм в вегетативной форме обладает обычной резистентностью, свойственной другим бактериям. Споры возбудителя отличаются исключительной устойчивостью. Они остаются жизнеспособными при воздействии низких температур (замораживание в жидком азоте (-190°С) не нарушает их жизнедеятельности), выдерживают кипячение в воде до 30 мин, воздействие текучим паром — до 12 мин, сухим жаром при температуре 120°С — до 2 ч. Прямой солнечный свет убивает споры только через 4-20 сут.
Этиловый спирт, эфир являются ненадежными средствами дезинфекции материала, содержащего споры. При работе с возбудителем сибирской язвы утверждены следующие средства и методы дезинфекции: активированный осветленный раствор хлорной извести концентрацией от 4 до 20%, растворы перекиси водорода концентрацией 3-10% в сочетании с 0,1-0,5% моющего средства или 1% муравьиной кислоты, хлорамин Б (1-4%), кальций гипохлорит нейтральный (15%), формалин (20-40%), едкий натр (10% при температуре 70°С), кипячение в течение 60 мин с 2%-ным раствором пищевой соды или с 2%-ным раствором кальцинированной соды, автоклавирование при 2 атм в течение 90 мин, прокаливание, сжигание. В Канаде и США в качестве метода деконтаминации помещений используется обработка парами перекиси водорода в концентрации 0,1-2 мг/л при помощи специальных генераторов пара. Высокая устойчивость спор возбудителя сибирской язвы обусловливает его длительную сохранность во внешней среде. Так, в воде споры сохраняются несколько лет, в почве — несколько десятилетий.
О высокой чувствительности В. anthracis к большинству широко применяемых антибиотиков говорилось выше. В литературе имеются лишь единичные сообщения, свидетельствующие о возможности циркуляции в природе и получении экспериментальным путем штаммов с измененной чувствительностью к антибиотикам.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 20.12.2019
Грамположительные
палочки, образующие эндоспоры.
Род
Bacillus вид B. anthracis
Впервые описаны
Полендером в 1849 году.
В зависимости
от ВВИ: кожная,
легочная и кишечная формы
Кожная
форма
– в глубоких слоях дермы на границе
подкожной клетчатки образуется карбункул
– очаг геморрагически-некротического
воспаления. Оттуда возбудитель разносится
в региональные л/узлы, в которых
развивается воспаление. 1-2% — генерализация
процесса
При легочной
и кишечной инфекция переходит в сепсис
Иммунитет
Специфический
противосибиреязвенный Ig для поздней
профилактики и лечения
77.
Возбудитель чумы. Таксономия Характеристика
возбудителя. Микробиологическая
диагностика, диагностические и
лечебно-профилактические препараты.
Устройство противочумного костюма.
Род
Yersinia вид Yersinia pestis
Открыты А.
Иерсеном в 1894 году
Вирулентность
связана с адгезией м/о на эпителиальных
тканях в зависимости от ВВИ.
В инвазии и
агрессии участвуют все ферменты и
токсины + «мышиный» токсин (блокиратор
функций клеточных м/х печени и сердца,
а также вызывает образование тромбов),
синтез которого регулируется плазмидой
Патогенез
зависит
от ВВИ: легочная, кожная, бубонная etc.
Первичная легочная чума возникает при
заражении аэрозольным путем, вторичная
гематогенно как осложнение.
1. Морфологические свойства возбудителя сибирской язвы Сибирская язва — тяжелое острое инфекционное заболевание человека и животных, которое вызывает сибиреязвенная спорообразующая палочка (Bacillus anthracis). В зависимости от первичного проникновения и последующей локализации этогомикроорганизма развиваются:
Сибирская язва может возникать на всех континентах и всех странах в связи с производством, потреблением и обработкой животного сырья (мясо, шерсть, шкуры и т. п.) и уходом за больными животными. Морфология — это крупный (1-2-х 6-10 мкм) палочковидный неподвижный микроорганизм, с обрубленными под прямым углом концами. В организме встречаются как единичные инкапсулированные палочки, так и их цепочки из 2-3 микробов, окруженные общей капсулой. В последнем случае концы сливаются и цепочка напоминает собой бамбуковую трость. Сибиреязвенные бациллы хорошо окрашиваются анилиновыми красками, грамположительные. Капсулы бывают отчетливо видны при окраске по Романовскому-Гимзе. Для выявления спор используют метод Циля-Нильсена. 2. Биология сибиреязвенного возбудителя, культуральные свойства Возбудитель сибирской язвы неприхотлив и может развиваться на различных лабораторных средах — на мясопептонном агаре и бульоне, желатине, молоке, экстрактах из семян растений, различных углеводных средах и даже настое сена. Палочка сибирской язвы является факультативным аэробом, поэтому на бактериологических питательных средах, при температуре 37-38 °С, хорошо растет при свободном доступе кислорода. На поверхности мясопептонного агара возбудитель сибирской язвы вырастает в виде типичных матового цвета, шероховатых безкапсульных колоний, состоящих из сплетений нитей с отростками («львиная грива», «голова медузы»). Гладкие, слизистые полупрозрачные колонии вырастают на поверхности при 80 °С на лошадиной сыворотке, отдельные палочки и цепочки колоний снаружи покрыты капсулой. В мясопептонном бульон бактерии сибирской язвы дают рост в виде комка ваты на дне пробирки, без помутнения среды. Капсулы при этом не образуются. Капсульная форма этого микроба является вирулентной. Оптимум роста находится в пределах 36 °С. При истощении и высыхании среды вегетативные формы микроба переходят в споровые. При этом в каждой палочке образуется одна центральная спора. Обязательным условием спорообразования является доступ кислорода и температура в пределах 12- 2 °С. В организме человека и в невскрытом трупе споры не образуются. Вегетативные формы без кислорода растут очень медленно. При посеве уколом в столбик агара или желатины растет «елочной верхушкой вниз»; верхняя часть желатины разжижается («пуговка») протеолитическим ферментом. На кровяном агаре — рост без гемолиза. Молоко свертывается на 2-4-е сутки с последующей пептонизацией. Большинство штаммов разлагают галактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу (медленно), левулезу с образованием кислоты без газа. Сероводород образуется не всегда. При повышении щелочности в бульонной культуре может иметь место помутнение. Отдельные штаммы одновременно с образованием типичного осадка на дне сосуда с жидкой средой могут вызывать умеренное помутнение жидких сред. Вирулентность возбудителя сибирской язвы связана с капсулой в организме инфицированных животных. Капсула не только предотвращает фагоцитоз возбудителя, защищает его от воздействия бактерицидных веществ инфицированного организма, но и способствует фиксации капсульных бацилл на клетках, которые затем подвергаются дегенерации и гибели. Бескапсульные сибиреязвенные бациллы этими свойствами не обладают. Вирулентность бацилл антрацис обусловлена также образованием ими токсина, как капсульными, так и бескапсульными штаммами. В теле возбудителя сибирской язвы содержится термостабильный «соматический» антиген полисахаридной природы, сохраняющийся длительное время в трупном материале; в капсуле обнаружен протеиновый антиген — полипептид D-глютаминовой кислоты. Исключительный интерес представляет наследственно измененные штаммы возбудителя сибирской язвы — мутанты, утратившие способность образовывать специфическую капсулу, превратившиеся из высоковирулентных штаммов в вакцинные штаммы, что используется для практических целей. Из наследственно измененных авирулентных штаммов изготавливают иммунопрофилактические вакцины, применяемые в медицинской и ветеринарной практике.
1. Устойчивость Вегетативные формы микробов без доступа кислорода относительно быстро отмирают, особенно под влияние мгнилостной флоры. Они быстро погибают при нагревании до 50 °С в течение 30 мин, при температуре 75 — 80°С — через минуту, а при воздействии различных дезинфицирующих средств — от действия сулемы, формальдегида, хлора в обычных концентрациях, гибель возбудителя наступает через несколько мин. К низкой температуре бациллы сибирской язвы весьма устойчивы. Сибиреязвенные споры высоко устойчивы во внешней среде. В воде сохраняются жизнеспособными в течение нескольких лет, в почве — десятки лет; сухой жар губит их при 140 °С за 3 ч, кипячение — через 45-60 мин. Споры устойчивы и к дезинфицирующим средствам; в шкурах животных, выделанных дублением, они могут сохраняться живыми длительное время, засаливание мяса не уничтожает спор. Выявление специфических свойств и отношение возбудителя к внешней среде имеют большое значение в связи с трудностями дифференциальной диагностики. В природе широко распространены ложносибиреязвенные палочки, которые морфологически невозможно отличить. Помимо этого имеются и другие спорогенные аэробы, такие как сенная, картофельная, капустная и корневидная палочки, которые могут находиться в различных объектах среды. Из старых лабораторных культур, почвы и сточных вод выделен специфический сибиреязвенный фаг, используемый для дифференциальной лабораторной диагностики возбудителя сибирской язвы. 2. Лабораторная диагностика Лабораторная диагностика сибирской язвы состоит в:
Для диагностики сибирской язвы у больных и ретроспективного анализа используют внутрикожную пробу с антраксилом. Для лабораторного исследования от больного в стерильную посуду берут содержимое пустулы, гной, отделяемое карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения, рвотные массы, соблюдают при этом правила работы с особо опасными инфекциями. Исследование начинают с бактериоскопии мазков, окрашенных по Граму и анилиновыми красками. Окраску мазков производят также раствором Ребигера на предмет обнаружения капсульных форм бацилл сибирской язвы — капсулы окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, бактерии в темно-фиолетовый. Для бактериологического исследования материал засевают в чашки Петри на мясопептонный агар и в пробирки с мясопептонным бульоном. Через 24 ч выращивания в термостате при 37 °С в положительных случаях на поверхности агара можно видеть матовые шероховатые колони с ворсистыми краями типа «львиной гривы», в пробирках с мясопептонным бульоном сибиреязвенный возбудитель растет на дне пробирки в виде комка ваты. Выделенные культуры в мазках исследуют под микроскопом на морфологию и в висячей капле — на подвижность. Биологическая проба. Окончательное подтверждение видовой принадлежности, выделенной культуры устанавливают путем подкожного заражения белых мышей, морских свинок, кроликов эмульсией из однодневной агаровой культуры. Наблюдение за животными проводят 10 дней. Павших животных вскрывают: делают мазки — отпечатки из внутренних органов для микрокопирования, производят посевы из крови, сердца, селезенки и инфильтрата на месте инъекции. Для ускоренной диагностики сибиреязвенной инфекции используют иммунофлюорецентный метод. Этот метод состоит в обработке мазков культур микробов люминесцентными сыворотками и просмотре их в люминесцентном микроскопе — бациллы сибирской язвы выглядят в виде палочек с ободком, светящимся зеленом цветом. Лаборатория может дать предварительное заключение по исследуемому материалу через сутки после его получения и окончательное через 3-4 дня после результатов постановки биологической пробы. Реакцию термопреципитации по Асколи проводят с целью обнаружения сибиреязвенного антигена. Для этого измельчают кусочки органов трупа, кожи, шерсти животных и кипятят в физиологическом растворе 10-15 мин. Полученный термоэкстракт фильтруют. Фильтрат наслаивают на преципигирующую сыворотку, разлитую в узкие пробирки. В положительных случаях на границе обеих жидкостей появляется мутно-белое кольцо преципитации. Аллергическая проба состоит во внутрикожном введении 0,1 мл антраксина — антигена, извлекаемого из оболочки сибиреязвенного возбудителя. На месте введения у больных и переболевших сибирской язвой появляются гиперемия и инфильтрат размером 3,5 х 3 см.
